La mitosis es un proceso fundamental de división celular que permite el crecimiento y la reparación de los tejidos en organismos eucariotas. En las plantas, este proceso se produce sobre todo en los meristemos, que son los tejidos que permiten el crecimiento y que se encuentran, entre otros lugares, en los extremos de los tallos y de las raíces. La mitosis es un proceso continuo en el que se pueden distinguir cuatro fases principales: profase, metafase, anafase y telofase.
Para poder observar estas fases al microscopio, es necesario realizar una preparación microscópica de un tejido en crecimiento, ya que en él se encuentran numerosas células en división. Una práctica común y efectiva para este fin es el estudio de las células del meristemo terminal de cebolla, que se encuentra en el ápice de la raíz.
Preparación Previa de las Raíces de Cebolla
Para la observación de la mitosis, la preparación de las raíces es un paso crucial. Cuatro o cinco días antes de comenzar la práctica, la cebolla debe ser colocada en un vaso de agua o precipitados de manera que sus raicillas queden sumergidas en agua y puedan crecer. Este método asegura que las raíces se desarrollen lo suficiente para la extracción del meristemo.
Materiales y Reactivos Clave para la Tinción
Para visualizar el material genético de las células y facilitar su estudio, es imprescindible el uso de colorantes específicos y técnicas de preparación adecuadas. Una de las técnicas implica la preparación de disoluciones como la orceína A y B, que son necesarias para la tinción del material genético de las células y para reblandecer las paredes celulares. Este reblandecimiento es fundamental para facilitar la técnica del "squash" (aplastamiento), que busca separar las células al máximo para obtener una mejor visión al microscopio. Alternativamente, otro colorante comúnmente utilizado es el azul de metileno, que es un colorante básico que tiñe el ADN.
Práctica: Mitosis en células del meristemo apical de cebolla (Allium cepa)
Protocolo de Tinción y Montaje de la Muestra
Una vez que las raíces de la cebolla han crecido adecuadamente, se procede a la preparación de la muestra. Se coge la cebolla y se cortan los dos primeros milímetros de una de las raicillas para eliminar la cofia, que es la estructura que protege los meristemos apicales de la raíz. Después, se realizan dos o tres cortes transversales finos de la parte final de la raicilla y se colocan en un vidrio de reloj.
Sobre estos cortes, se añaden unas gotas de azul de metileno hasta que queden totalmente cubiertos. A continuación, con ayuda de unas pinzas, se sujeta el vidrio de reloj y se calienta en la llama del mechero Bunsen sin que llegue a ebullición y hasta que emita vapores. Este paso ayuda a que el colorante penetre en las células y, en combinación con el reblandecimiento, prepare la muestra para el siguiente paso.
La Técnica del "Squash" (Aplastamiento)
Una vez terminada la tinción, se cogen con cuidado los cortes y se ponen sobre un portaobjetos. Se añaden unas gotas más de azul de metileno, se coloca encima el cubreobjetos y se seca con un papel de filtro el exceso de colorante si es necesario. El siguiente paso es fundamental: se dobla un cuadradito de papel secante, se coloca sobre el cubreobjetos y se realiza lo que se conoce como squash o aplastamiento. Esta técnica consiste en chafar con el dedo pulgar la muestra para separar las células al máximo y obtener una mejor visión al microscopio, presionando y realizando un giro para aplastar el tejido y eliminar cualquier exceso de colorante.
Resultados y Fases de la Mitosis Observables
La aplicación correcta de este protocolo permite obtener resultados óptimos. En experiencias anteriores, los resultados han sido fantásticos, logrando que las fases de la mitosis se vieran con una claridad excepcional, a diferencia de otros años. Al observar la muestra al microscopio, se pueden identificar claramente las distintas etapas de la división celular: profase (condensación de cromosomas), metafase (alineación en el ecuador), anafase (separación de cromátidas) y telofase (descondensación y formación de nuevas envolturas nucleares).